【百欧泰生物】单糖组分分析：从分子层面探秘糖类

单糖组分分析是确定样品中各类单糖种类及含量的关键技术。在食品领域，它能精准剖析水果、蜂蜜等含糖量，助力品质把控与风味研究；医药研发里，可揭示多糖类药物结构与活性关联，辅助新药开发。其优势显著，凭借气相色谱、高效液相色谱等技术，分析灵敏度高、分离效果出色，还能同时测定多种单糖，哪怕复杂样品也能精准解析，为多行业科研、生产筑牢数据根基，推动行业发展与创新。

实验方法

HPLC 分析植物叶片为例

1. 样品准备

1.1 样品为植物叶片，取新鲜叶片5g，洗净后用滤纸吸干表面水分，剪碎置于研钵中。

1.2 加入10mL 80% 乙醇溶液，研磨成匀浆，转移至50mL离心管。

1.3 80℃水浴提取30分钟，期间每隔10分钟振荡一次，使提取更充分。

1.4 4000r/min 离心15分钟，收集上清液。沉淀再用10mL 80% 乙醇重复提取两次，合并上清液。

1.5 将上清液转移至旋转蒸发仪，在 45℃下减压浓缩至近干，去除乙醇。

2. 样品处理

2.1 向浓缩后的样品中加入5mL去离子水，溶解残渣，转移至透析袋（截留分子量8000-14000Da）中。

2.2 用去离子水透析24小时，期间换液3-4次，去除小分子杂质。

2.3 透析结束后，将透析袋内的溶液转移至50mL容量瓶，用去离子水定容至刻度。

3. 衍生化反应

3.1 取 1mL 上述样品溶液至离心管，加入100μL 0.5mol/L 的氢氧化钠溶液，混匀。

3.2 再加入 100μL 10mg/mL 的 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）甲醇溶液，涡旋混匀。

3.3 70℃水浴反应60分钟，期间每隔15分钟振荡一次。

3.4 反应结束后，冷却至室温，加入100μL 0.5mol/L 的盐酸溶液中和，调节pH至中性。

3.5 加入2mL氯仿，振荡萃取5分钟，10000r/min 离心5分钟，弃去下层氯仿相。重复萃取两次，去除多余的 PMP。

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3.6 取上层水相，过0.45μm水系滤膜，转移至进样瓶，待HPLC分析。

4. HPLC 分析

4.1 色谱柱：氨基柱（250mm×4.6mm，5μm）。

4.2 流动相：乙腈：水=75:25（V/V），使用前经0.45μm 有机系滤膜过滤，并超声脱气30分钟。

4.3 流速：1.0mL/min，柱温：30℃，进样量：20μL。

4.4 检测器：示差折光检测器，温度 40℃。

5. 数据处理

5.1 用葡萄糖、果糖、半乳糖等单糖标准品配制成不同浓度的系列标准溶液（如 0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL），按上述衍生化和 HPLC 分析步骤操作。

5.2 以峰面积对浓度绘制标准曲线，得到线性回归方程。

5.3 根据样品中各单糖衍生物的峰面积，代入相应的标准曲线方程，计算出样品中各单糖的含量。

单糖组分分析的实验中需要注意的细节

1. 样品采集与保存

样品来源：不同来源、品种、生长环境的样品，其单糖组分本身可能存在差异，应确保样品具有代表性，避免局部特殊情况影响整体结果。

采集部位：同一植株不同部位的单糖含量和组成可能不同。

保存条件：样品采集后若保存不当，可能发生糖代谢或降解。

2. 样品前处理

提取溶剂：不同溶剂对单糖的提取效率不同，如乙醇浓度、水的纯度等。提取时间和温度：时间过短、温度过低，单糖提取不充分；时间过长、温度过高，可能使单糖发生降解或转化。

净化步骤：净化不彻底会残留杂质，干扰后续分析。

3. 衍生化过程

衍生化试剂：试剂的纯度、活性及保存条件会影响衍生化效果。

反应条件：衍生化反应的温度、时间、pH值等需严格控制。

4. 仪器分析

仪器参数：色谱柱类型、流动相组成、流速、柱温、检测器参数等设置不当都会影响分离效果和检测结果。如流动相比例不准确，可能导致单糖峰分离度差，无法准确识别和定量。

仪器状态：仪器的稳定性、进样系统的准确性等对结果影响较大。

5. 数据处理

标准曲线绘制：标准品的纯度、浓度准确性、标准溶液配制过程中的误差等都会影响标准曲线的准确性。

数据处理方法：选择的积分方法、基线校正方式等不同，会导致峰面积计算结果不同。

本篇文章对科研爱好者有一定参考价值。但它不能替代专业领域更详尽、精准且深入的专业知识体系，也不等同于实际实验操作流程。若阅读时发现侵权或争议内容，请立即联系作者删除，以保文章合法性与合规性，维护良好科研交流环境。

参考文献

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